化妆品防腐体系挑战测试（PET）执行标准

在化妆品配方设计中，防腐体系的有效性直接关系到产品的微生物安全性和货架期稳定性。对于化妆品企业而言，防腐挑战测试（Preservation Efficacy Test，PET）是验证防腐体系能否有效抑制微生物生长的“试金石”，也是产品上市前不可或缺的安全评估环节。

化妆品防腐体系挑战测试是一种通过人工接种微生物、模拟产品在使用和储存过程中可能受到的微生物污染，评估防腐体系抑菌效果的实验室试验方法。根据ISO 11930:2019《化妆品微生物学 化妆品防腐体系的抗菌保护评价》及《化妆品安全技术规范》相关要求，PET试验需在无菌条件下向化妆品样品中接种规定菌株，分别在接种后第0、2、7、14、21、28天测定存活微生物数量，通过菌落对数减少值评估防腐效能。检测项目涵盖了细菌挑战测试、真菌挑战测试、中和剂验证、防腐体系稳定性评估等多个维度，能够全面评价化妆品防腐体系的抑菌能力和持久性，帮助企业完成产品备案与质量安全管控。

一、微生物接种与挑战菌株选择

1、细菌挑战菌株：根据ISO 11930:2019标准，防腐挑战测试必须使用以下标准菌株：铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，ATCC 9027）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，ATCC 6538）、大肠埃希菌（Escherichia coli，ATCC 8739）。这三类细菌是化妆品中常见的污染菌，能够有效反映防腐体系对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抑制能力。接种浓度要求为每克或每毫升样品中菌落总数达到10⁶-10⁷ CFU。

2、真菌挑战菌株：需同时接种酵母菌和霉菌，包括：白念珠菌（Candida albicans，ATCC 10231）和黑曲霉（Aspergillus niger，ATCC 16404）。真菌对防腐剂的敏感性通常低于细菌，是防腐挑战测试的难点。接种浓度同样要求达到10⁶-10⁷ CFU/g或CFU/mL。

3、产品特定菌株补充：对于特殊剂型或宣称特定功效的产品，可额外接种产品使用过程中可能引入的环境菌或致病菌，如洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）等。2026年新规中，对可能污染水性化妆品的耐药菌株提出了更高的检测要求。

二、中和剂验证与试验系统确认

1、中和剂验证试验：在进行防腐挑战测试前，必须对中和剂体系进行有效性验证。中和剂用于消除样品中防腐成分对计数结果的干扰，确保测得的微生物数量真实反映样品中的存活菌数。验证方法包括：将已知浓度的菌悬液加入含中和剂的样品稀释液中，回收率应达到50%-200%之间，且与阳性对照无显著差异。

2、中和剂毒性测试：验证中和剂本身对微生物是否有毒性作用。将已知浓度的菌悬液加入中和剂溶液中，作用规定时间后计数，与不加中和剂的阳性对照比较，菌落数减少不应超过50%。

3、试验系统有效性确认：每次防腐挑战测试均应设置阳性对照（不加样品的菌悬液）和阴性对照（无菌培养基），确认试验过程中微生物的活性和计数系统的准确性。阳性对照的菌落计数应在预期范围内，阴性对照应无菌生长。

三、挑战测试试验周期与取样点

1、标准试验周期：防腐挑战测试的观察周期为28天，取样时间点通常为接种后0天（立即）、2天、7天、14天、21天和28天。根据ISO 11930标准，各时间点需测定存活微生物数量，计算对数减少值（Log Reduction）。

2、快速测试方案：对于研发阶段的配方筛选，可采用7天或14天的快速测试方案，评估防腐体系的初步抑菌效果。但最终用于产品备案的防腐挑战报告必须完成28天完整周期。

3、长期稳定性验证：对于宣称保质期超过3年的产品，建议在加速稳定性试验（40℃±2℃/75%RH±5%RH）条件下进行防腐挑战测试，验证防腐体系在高温高湿条件下的持久有效性。

四、防腐效能判定标准

1、ISO 11930标准判定准则：根据ISO 11930:2019规定，防腐体系效能分为A级（良好保护）和B级（有限保护）。A级判定标准：细菌在接种后第14天菌落数减少至初始接种量的0.1%以下（即Log Reduction≥3），且从第14天到第28天菌落数无增加；真菌在接种后第28天菌落数减少至初始接种量的0.1%以下（Log Reduction≥3）。B级判定标准：细菌在接种后第14天菌落数减少至初始接种量的10%以下（Log Reduction≥1），且从第14天到第28天菌落数无增加；真菌在接种后第14天菌落数减少至初始接种量的10%以下（Log Reduction≥1），且从第14天到第28天菌落数无增加。

2、USP 51标准判定准则：美国药典USP 51《抗菌有效性测试》标准要求：细菌在接种后第14天菌落数减少至初始接种量的0.1%（Log Reduction≥3），且第28天菌落数与第14天相比无增加；真菌在接种后第14天菌落数与初始接种量相比无增加（Log Reduction≥0），且第28天菌落数与第14天相比无增加或减少至初始接种量的0.1%以下。

3、《化妆品安全技术规范》要求：我国《化妆品安全技术规范》对防腐挑战测试未作强制性规定，但对于宣称“不含防腐剂”“无添加”的产品，需提供防腐挑战测试报告以证明产品在未添加传统防腐剂的情况下仍能保持微生物安全性。

五、防腐体系评估的其他关键要素

1、防腐剂含量分析：在防腐挑战测试的同时，应采用高效液相色谱法（HPLC）或气相色谱法（GC）对样品中的防腐剂含量进行定量分析，确认防腐剂含量与配方设计值一致，且在产品货架期内保持稳定。

2、防腐体系协同效应评估：对于复配防腐体系，需评估各防腐剂之间的协同效应。通过对比单一防腐剂与复配体系的防腐挑战结果，验证复配体系是否具有协同增效作用，为配方优化提供依据。

3、包装对防腐效能的影响：不同包装材质（如塑料瓶、玻璃瓶、软管、真空泵等）可能吸附防腐剂或影响防腐剂稳定性。建议在最终包装容器中进行防腐挑战测试，验证包装系统对防腐效能的影响。

防腐体系挑战测试（PET）是评价化妆品防腐系统能否有效抑制微生物生长、防止产品腐败变质的核心试验方法。根据国际化妆品微生物学标准ISO 11930:2019的定义，防腐挑战测试通过模拟产品在制造、储存和使用过程中可能受到的微生物污染，定量评估防腐体系的抑菌能力。测试结果分为A级（良好保护）和B级（有限保护），A级产品可在标签中宣称“通过防腐挑战测试”，B级产品则需在使用说明中标注“开封后请尽快使用”。随着消费者对化妆品安全性和天然性要求的提高，“无防腐剂”“无添加”宣称的产品日益增多，这类产品更需通过防腐挑战测试证明其在未添加传统防腐剂的情况下仍能保持微生物安全。根据2026年3月国家药监局发布的《关于化妆品注册备案有关事项的公告（征求意见稿）》，对于配方体系近似的产品，可共用代表性产品的防腐挑战测试报告，为企业节省检测成本提供了政策支持。通过科学、规范的防腐挑战测试，企业不仅能够验证配方设计的有效性，更能向消费者证明产品的微生物安全可靠性。

汇策集团海沣检测作为专业的化妆品、日化品第三方检测机构，拥有CNAS、CMA双资质认证，在防腐挑战测试领域具备丰富的技术经验和专业的检测能力。我们严格按照ISO 11930:2019、USP 51及《化妆品安全技术规范》要求，开展化妆品防腐体系挑战测试（PET）服务，涵盖细菌挑战（铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌）、真菌挑战（白念珠菌、黑曲霉）、中和剂验证、防腐剂含量分析及防腐效能综合评估等核心项目。我们的微生物实验室配备生物安全柜、恒温培养箱、菌落计数器等专业设备，可承接膏霜、乳液、水剂、粉剂、喷雾等多种剂型化妆品的防腐挑战测试，出具的检测报告权威可靠，是化妆品企业验证防腐体系有效性、完成产品备案的值得信赖的合作伙伴。欢迎联系专业工程师获取化妆品防腐体系挑战测试方案及报价咨询。